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【特別推薦】:唾液酸(SA)測定試劑使用說明、性能指標  
發布者:idrfz.chen   
 

 (本試劑僅用于科研、實驗、技術支持,不直接應用于臨床診斷)

【簡介】

用于全自動法測定唾液酸含量。

唾液酸是細胞膜糖蛋白的重要組成部分,與生物體的許多生物學功能有關,且與細胞惡變、癌轉移、浸潤、失去接觸性抑制、細胞粘附性降低以及腫瘤抗原性密切相關。測定血清唾液酸濃度,可作為癌腫診斷輔助性指標和療效觀察指標。

【測定方法】

神經氨酸苷酶-NANA醛縮酶偶聯連續監測法

【測定原理】

第一步,樣本中的結合型唾液酸經神經氨酸苷酶作用后轉變為N-乙酰神經氨酸;第二步,N-乙酰神經氨酸在NANA醛縮酶作用下生存丙酮酸,生成的丙酮酸在乳酸脫氫酶的作用下使NADH脫氫氧化,監測340nm處吸光度的變化速率,與標準比較后可對樣本中的唾液酸進行定量。

【試劑盒組成】

 

   

   

   

試劑

液體雙試劑

試劑I: 試劑II=3:1

Tris-HCl緩沖液、神經氨酸苷酶、NANA醛縮酶、乳酸脫氫酶、NADH

適量

SA校準品

液體1ml

唾液酸、穩定劑

見標簽

SA質控品

凍干1ml

唾液酸、穩定劑

見標簽

【樣本要求】

新鮮血清標本。樣本采集后,應盡快分離血清。樣本置于2~8可穩定7天,冰凍避光保存穩定6個月。

【測定步驟】

1.本試劑為液體雙試劑,可直接使用。

2.測定參數:波長:340nm;光徑:10mm;溫度:37

3.測定方法:

加入物

測定管(U

標準管(S

空白管(B

R1 (μl

180

180

180

標本  (μl

6

-

-

標準液(μl

-

6

-

蒸餾水(μl

-

-

6

混勻,置37孵育3~5分鐘,讀取各管吸光度A1

R2(μl

60

60

60

混勻,置37℃延滯90秒后監測90秒內各管吸光度變化,計算每分鐘吸光度變化率ΔA/min

4.上機參數:

 

37

血清+R1反應時間

180~300

樣本量

6uL

340nm

試劑Ⅰ

180uL

405nm

試劑Ⅱ

60uL

血清+R1+R2反應時間

180

5.計算:

 

SAmg/dL= (ΔAU/min ΔAB/min)/(ΔAS/min ΔAB/min×準管濃度

 

【性能指標】

1 空白吸光度A1.000 空白吸光度變化速率0.030

2 線性范圍 0-200 mg/dL

3 批內/分析內精密度  CV5%;批間相對極差 7%;

4 準確性  相對偏差不超過±10%。

5 抗干擾性  血清TG<8.0mmol/L、抗壞血酸<120mg/dL、膽紅素<60mg/dL、血紅蛋白<60mg/dL對測定結果沒有影響。

6 方法對照  用本測定試劑和某進口試劑同時測定100例血清樣本中SA含量,結果顯示相關系數r = 0.998

【注意事項】

1、試劑變混濁或空白吸光度值<1.000時,將不能使用,應棄去;

2、建議各實驗室建立自己的正常值范圍;

3、試劑與樣本量可根據需要按比例調節;

4、請勿用嘴直接吸取試劑,避免接觸皮膚、眼睛及粘膜,一旦接觸,應即用水沖洗污染部位;

5、使用配套的校準品校準,校準周期為30天,更換試劑批號時需要重新校準。建議使用正常值和病理值生化質控血清進行室內質控,測定的控制值應在確定的限制范圍內,若控制值失控,實驗室應采取適當的糾正措施。

【參考范圍

血清 46.9-76.3 mg/dL

建議各實驗室建立自己的正常參考值范圍。

【儲存條件與有效期】

未開封的試劑在2-8避光條件下可穩定14個月,置37℃水浴至少可穩定7天。

試劑開封后,存放在分析儀試劑倉中(2-8)的試劑在30天內性質穩定。

【參考文獻】

1. Crook M. The determination of plasma or serum sialic acid. Clin Biochem. 1993; 26(1):31-38.

2. Igor A. Sobenin, et al. Optimization of the assay for sialic acid determination in low density lipoprotein. Journal of Lipid Research. 1998 (39): 2293-2295.

 

 

 

 

 

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